SDS是一種陰離子表面活性劑，能打斷蛋白質(zhì)的氫鍵和疏水鍵，并按一定的比例和蛋白質(zhì)分子結(jié)合成復(fù)合物，使蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷的量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)其本身原有的電荷，掩蓋了各種蛋白分子間天然的電荷差異。因此，各種蛋白質(zhì)-SDS 復(fù)合物在電泳時(shí)的遷移率，不再受原有電荷和分子形狀的影響，而只是棒長(zhǎng)的函數(shù)。這種電泳方法稱為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（簡(jiǎn)稱SDS—PAGE）。實(shí)驗(yàn)使用過(guò)程中，還加入DTT或者巰基乙醇，以打開(kāi)蛋白間的二硫鍵，破壞蛋白質(zhì)的四級(jí)結(jié)構(gòu)。SDS—PAGE常采用垂直板不連續(xù)系統(tǒng)（分離膠與濃縮膠）。
本公司有多種用于樣品制備的組織裂解液，每款裂解液會(huì)配備一管蛋白酶抑制劑pmsf。本公司還有多種蛋白酶抑制劑供您使用。
| 產(chǎn)品貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 |
|---|---|
| R0010 | RIPA_ |
| R0020 | 普通RIPA |
| R0030 | 非變性組織細(xì)胞裂解液 |
| A8260 | Aprotinin 蛋白酶抑制劑（抑肽酶） |
| P8100 | Pepstatin A 胃蛋白酶抑制劑 |
| P1260 | (All-in-one,100x)蛋白磷酸酶抑制劑混合物 |
| T8031 | Trypsin inhibitor 胰蛋白酶抑制劑 |
| P1260 | (All-in-one,100x)蛋白磷酸酶抑制劑混合物 |
| 539133 | Protease Inhibitor Cocktail Set VI |
| 539134 | Protease Inhibitor Cocktail Set III |
| PC0030 | Lowry法蛋白濃度測(cè)定試劑盒 |
| PC0010 | Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒> |
| PC0020 | BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒 |
注：本系列蛋白提取試劑所提取的蛋白由于含有去污劑，所以不適合于Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒，請(qǐng)選擇BCA法或者Lowry法。
| 產(chǎn)品貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 說(shuō)明 |
|---|---|---|
| R0010 | RIPA組織/細(xì)胞裂解液 | 在普通RIPA的基礎(chǔ)上改進(jìn)而來(lái),含蛋白酶抑制劑及磷酸酶抑制劑(配有一支PMSF) |
| R0020 | RIPA組織/細(xì)胞裂解液 | RIPA經(jīng)典配方，適于絕大多數(shù)蛋白-蛋白相互作用的免疫實(shí)驗(yàn)。組成： 50 mM Tris-HCl (pH 7.4), 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.1% SDS.(配有一支PMSF) 保存： 4 ºC避光 |
| R0030 | 非變性組織/細(xì)胞裂解液 | 非變性條件下裂解的蛋白產(chǎn)物大限度地保留了蛋白的特性和功能，如抗原-抗體結(jié)合或酶學(xué)活性，因此適宜于進(jìn)行免疫共沉淀。 |
| R0050 | 核蛋白提取試劑盒 | |
| BC3640 | 全蛋白提取試劑盒 | |
| BC3720 | 植物蛋白提取試劑盒 | |
| BC3710 | 全蛋白提取試劑盒（強(qiáng)） | |
| BC3711 | 全蛋白提取試劑盒（中） | |
| BC3730 | 磷酸化蛋白提取試劑盒 | |
| BC3740 | 胞漿蛋白提取試劑盒 |
蛋白含量測(cè)定是以標(biāo)準(zhǔn)蛋白作為對(duì)照，根據(jù)蛋白濃度不同，吸光值不同而達(dá)到定量的目的。有些方法是理解蛋白本身的吸光值（紫外光譜吸收法）來(lái)定量，但更多的是用染料對(duì)蛋白進(jìn)行染色，利用染料與蛋白結(jié)合顯出與原染料及蛋白不同的吸光值來(lái)定量的。后一種方法應(yīng)用更普遍。蛋白定量方法的選擇，應(yīng)該考慮到蛋白結(jié)構(gòu)（標(biāo)準(zhǔn)品選擇）、蛋白溶液內(nèi)干擾物等因素的影響。
| 產(chǎn)品貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 組成 | 說(shuō)明 | |||||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| PC0010 | Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒 |
| 干擾物質(zhì)少， Tris、糖、甘油、巰基乙醇、氨、EDTA等均不干擾測(cè)定。 | |||||||||||||||
| PC0020 | BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒 |
| BCA法的顯著優(yōu)點(diǎn)是不受去垢劑的影響。 | |||||||||||||||
| PC0030 | Lowry法蛋白濃度測(cè)定試劑盒 |
| Lowry法測(cè)定較為不受脂類(lèi)物質(zhì)干擾，適于脂類(lèi)含量較高的樣品測(cè)定。也能耐受相當(dāng)濃度的去垢劑如SDS。 |
SDS-PAGE如今已形成成熟的方案，實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)自己的情況和習(xí)慣來(lái)選擇試劑。如選擇1、2、3、4、5、6、7、8、9全部試劑可自己配制。也可以選擇配制好的試劑。如10、11、12、13/14、16、9、20。還可選擇10、13/14、16、9、17、18、19、20。
| 系號(hào) | 產(chǎn)品貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 系號(hào) | 產(chǎn)品貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 |
|---|---|---|---|---|---|
| 1 | T8060 | TRIS 三羥甲基氨基甲烷 | 11 | S1051 | 4XSDS-PAGE分離膠緩沖液（PH=8.8） |
| 2 | G8200 | Glycine 甘氨酸 | 12 | S1052 | 4XSDS-PAGE濃縮膠緩沖液（PH=6.8） |
| 3 | S8010 | SDS 十二烷基硫酸鈉 | 13 | P1016 | 4×蛋白上樣緩沖液(含β-巰基乙醇) |
| 4 | A8080 | Acrylamide 丙烯酰胺 | 14 | P1015 | 4×蛋白上樣緩沖液(含DTT) |
| 5 | M8200 | N,N-Methylene Bisacrylamide甲叉雙丙烯酰胺 | 15 | D1070 | 1M DTT |
| 6 | A8090 | Ammonium Persulfate 過(guò)硫酸胺 | 16 | A1030 | 10%過(guò)硫酸氨 |
| 7 | D8220 | DTT 二硫蘇糖醇 | 17 | T1020 | 1M Tris-HCL (PH6.8) |
| 8 | M8210 | β-Mercaptoethanol β-巰基乙醇 | 18 | T1010 | 1.5M Tris-HCL(PH8.8) |
| 9 | T8090 | TEMED 四甲基乙二胺 | 19 | S1010 | 10%SDS |
| 10 | A1010 | 30%丙烯酰胺（29:1） | 20 | T1070 | 5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液 |
凝膠配制表（一）
| 分離膠12% | 分離膠10% | 分離膠8% | 濃縮膠（3%） | |
|---|---|---|---|---|
| 總體積 | 10ml | 10ml | 10ml | 5ml |
| 4X分離膠緩沖液（PH8.8） | 2.5ml | 2.5ml | 2.5ml | 0 |
| 4X濃縮膠緩沖液（PH6.8） | 0 | 0 | 0 | 1.25ml |
| 30%丙烯酰胺(29:1) | 4ml | 3.3ml | 2.7ml | 0.5ml |
| ddH2O | 3.4ml | 4.1ml | 4.7ml | 3.2ml |
| 10%過(guò)硫酸銨 | 100ul | 100ul | 100ul | 75ul |
| TEMED | 10ul | 10ul | 10ul | 7.5ul |
凝膠配制表（二）
| 分離膠12% | 分離膠10% | 分離膠8% | 濃縮膠（3%） | |
|---|---|---|---|---|
| 總體積 | 10ml | 10ml | 10ml | 5ml |
| 30%丙烯酰胺(29:1) | 4ml | 3.3ml | 2.7ml | 0.5ml |
| 1M Tris-HCL (PH6.8) | 0 | 0 | 0 | 0.625ml |
| 1.5M Tris-HCL(PH8.8) | 2.5ml | 2.5ml | 2.5ml | 0 |
| 10%SDS | 100ul | 100ul | 100ul | 50ul |
| ddH2O | 3.3ml | 4.0ml | 4.6ml | 3.75ml |
| 10%過(guò)硫酸銨 | 100ul | 100ul | 100ul | 75ul |
| TEMED | 10ul | 10ul | 10ul | 7.5ul |
本公司的丙烯酰胺是29：1的，如需要定制其他規(guī)格的可以。 為了客戶實(shí)驗(yàn)方便，我們生產(chǎn)的SDS-PAGE凝膠制備試劑盒（P1200）和Tris- Tricine-SDS-PAGE 凝膠制備試劑盒（P1320），后者主要用于小于10kd的蛋白和多肽的分離。包含了制膠的全部試劑，方便客戶操作。 如果您想節(jié)省時(shí)間，也可以使用我們的預(yù)制膠，無(wú)需配膠，直接跑電泳即可。本公司的上樣緩沖液既有用于非變性的（P1017、p1027）又有變性的（P1015、P1016、P1017、P1018），有不同的稀釋倍數(shù)，可以滿足客戶的多種實(shí)驗(yàn)需求。 電泳緩沖液既有用于普通的tris-甘氨酸緩沖系統(tǒng)的產(chǎn)品（T1070），又有用于Bis-tris這種系統(tǒng)的MOPS緩沖液（T1510） 蛋白marker有多種，非預(yù)染marker、預(yù)染marker、彩虹marker、Western Blot Marker。而且還有GE原裝的變性非變性marker，廣泛的分子量和用途供您選擇。
| 產(chǎn)品貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 |
|---|---|---|---|
| P1015 | 4×蛋白上樣緩沖液（含DTT） | P1016 | 4×蛋白上樣緩沖液（含β-巰基乙醇） |
| P1018 | 2×蛋白上樣緩沖液（含DTT） | P1019 | 2×蛋白上樣緩沖液（含β-巰基乙醇） |
| P1017 | 4×非變性蛋白上樣緩沖液 | p1027 | 2×非變性蛋白上樣緩沖液 |
| T1070 | 5×Tris甘氨酸電泳緩沖液 | T1510 | Tris-Mops緩沖液(10×) |
| PR1300-15 | 次高分子量蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn) 15T | PR1400-20 | 低分子量蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)(14.4-97.4KD) 20T |
| PR1500-10 | 次高分子量蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn) 10T | PR1600-20 | 預(yù)染低分子量蛋白質(zhì)(14.4-97.4KD) 20T |
| PR1700-10 | 預(yù)染次高分子量蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn) 10T | PR1800-10 | Western Blot Marker 10T(50ul） |
| PR1900 | 預(yù)染超低分子量蛋白marker（3.3-31KD) 20T | PR1910 | 彩虹180廣譜蛋白marker 20T (100μ1)/50T(250μ1) /100T(500μ1) |
| PR1920 | 彩虹245廣譜蛋白marker 20T (100μ1)/50T(250μ1) /100T(500μ1) | PR1930 | 彩虹245plus廣譜蛋白marker 20T (100μ1)/50T(250μ1) /100T(500μ1) |
跑膠后的染色可以用銀染或者考染的方法，如果蛋白量少，推薦使用靈敏度高一些的銀染試劑盒（G7210），否則常規(guī)染色可以使用（P1305）和（P1300），其中P1300的優(yōu)點(diǎn)是染色時(shí)間短，半小時(shí)內(nèi)即可檢測(cè)到蛋白電泳條帶，節(jié)省了染色脫色的時(shí)間。
| 產(chǎn)品貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 |
|---|---|
| C8430 | 考馬斯亮藍(lán)R 250染色液 |
| P1300 | 考馬斯亮藍(lán)蛋白膠快速染色液 |
| P1305 | 考馬斯亮藍(lán)染色套裝 |
| G7210 | PAGE凝膠銀染試劑盒 |
| PG00810-S | Precast-Gel預(yù)制膠 | 變性預(yù)制膠 | 10孔 | 8% | 10片/盒 |
| PG01010-S | Precast-Gel預(yù)制膠 | 變性預(yù)制膠 | 10孔 | 10% | 10片/盒 |
| PG01210-S | Precast-Gel預(yù)制膠 | 變性預(yù)制膠 | 10孔 | 12% | 10片/盒 |
| PG01510-S | Precast-Gel預(yù)制膠 | 變性預(yù)制膠 | 10孔 | 15% | 10片/盒 |
| PG41510-S | Precast-Gel預(yù)制膠 | 變性預(yù)制膠 | 10孔 | 4～15% | 10片/盒 |
| PG42010-S | Precast-Gel預(yù)制膠 | 變性預(yù)制膠 | 10孔 | 4～20% | 10片/盒 |
| PG82010-S | Precast-Gel預(yù)制膠 | 變性預(yù)制膠 | 10孔 | 8～20% | 10片/盒 |
| PG00810-N | Precast-Gel預(yù)制膠 | 非變性預(yù)制膠 | 10孔 | 8% | 10片/盒 |
| PG01010-N | Precast-Gel預(yù)制膠 | 非變性預(yù)制膠 | 10孔 | 10% | 10片/盒 |
| PG01210-N | Precast-Gel預(yù)制膠 | 非變性預(yù)制膠 | 10孔 | 12% | 10片/盒 |
| PG01510-N | Precast-Gel預(yù)制膠 | 非變性預(yù)制膠 | 10孔 | 15% | 10片/盒 |
| PG41510-N | Precast-Gel預(yù)制膠 | 非變性預(yù)制膠 | 10孔 | 4-15% | 10片/盒 |
| PG42010-N | Precast-Gel預(yù)制膠 | 非變性預(yù)制膠 | 10孔 | 4～20% | 10片/盒 |
| PG82010-N | Precast-Gel預(yù)制膠 | 非變性預(yù)制膠 | 10孔 | 8～20% | 10片/盒 |
經(jīng)過(guò)PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類(lèi)型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過(guò)底物顯色或放射自顯影以檢測(cè)電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分，此技術(shù)稱為免疫印跡（Western blot）。Western blotting檢測(cè)系統(tǒng)除需要過(guò)氧化物酶標(biāo)記的各種二抗外，還需要配套的顯色試劑。索萊寶提供DAB顯色和ECL化學(xué)發(fā)光兩種試劑及相應(yīng)試劑盒。
和PALL公司的尼龍膜和pvdf膜，具有0.22um和0.45um兩種規(guī)格。 轉(zhuǎn)膜后還可以用P0012（10×麗春紅）檢測(cè)轉(zhuǎn)膜效果，尤其是針對(duì)NC膜效果更佳。 為了節(jié)省成本和時(shí)間，您可以選擇本公司的SW3020（Western Blot膜再生液）對(duì)用過(guò)的膜進(jìn)行清洗，隨后，可以使用不同的抗體進(jìn)行下一輪Western Blot實(shí)驗(yàn)。 膜再生液實(shí)質(zhì)是在不影響膜上結(jié)合的抗原的條件下將抗體洗脫下來(lái)，實(shí)際操作中，膜類(lèi)型、抗體類(lèi)型、濃度及抗原特性都影響洗脫難易度。 注意：適用于 ECL和類(lèi)似的化學(xué)發(fā)光試劑進(jìn)行的 Western 檢測(cè)。不適用于非化學(xué)發(fā)光試劑進(jìn)行的 Western檢測(cè)，例如DAB，NBT/BCIP。
| 產(chǎn)品貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 |
|---|---|
| P0012 | 10×麗春紅 |
| SW3010 | 膜封閉液 |
| A1800 | 抗體稀釋液 |
| A1810 | 一抗稀釋液 |
| A1820 | HRP標(biāo)記抗體稀釋液 |
| A1830 | AP標(biāo)記抗體稀釋液 |
| A1840 | 熒光抗體稀釋液 |
| T1085 | 1×TBST |
實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中您可以針對(duì)不同的抗體選擇上面合適的稀釋液。
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