今天我給大家講講微生物檢查LB培養(yǎng)基常用的滅菌方法:
1、濕熱滅菌:蒸汽在冷凝時(shí)釋放出大量潛能,并且蒸汽具有強(qiáng)大穿透力,蒸汽的濕熱破壞菌體蛋白質(zhì)和核酸的化學(xué)鍵,使酶失活,微生物因代謝障礙而死亡。濕熱滅菌的效果,取決于致死溫度和致死時(shí)間。致死溫度是殺滅微生物的極限溫度。致死時(shí)間是在致死溫度下殺滅全部微生物所需時(shí)間。
高壓蒸汽滅菌適合于耐高溫LB培養(yǎng)基、接種器械和蒸餾水的滅菌。培養(yǎng)基分裝后應(yīng)立即滅菌,應(yīng)在當(dāng)天內(nèi)完成滅菌工作,不可過夜。消毒時(shí)間不宜過長,也不能超過規(guī)定的壓力范圍,否則有機(jī)物質(zhì)就會在高溫下分解,失去營養(yǎng)作用,也會使培養(yǎng)基變質(zhì)、變色,甚至難以凝固。
2、過濾除菌:一些抗生素及有機(jī)物等,遇熱容易分解,不能與LB培養(yǎng)基一起進(jìn)行高溫滅菌,而要使用細(xì)菌過濾器濾去其中的雜菌,例如含抗生素的沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。過濾后的溶液要立即加入培養(yǎng)基中,若為液體培養(yǎng)基,可在培養(yǎng)基冷卻至30℃時(shí)加入;若為固體培養(yǎng)基,必須在培養(yǎng)基凝固之前(50-60℃)加入,振蕩使溶液與其他成分混合均勻。
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