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纖維素酶測定試劑盒的操作步驟
   纖維素酶(β-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶)是降解纖維素生成葡萄糖的一組酶的總稱,它不是單體酶,而是起協(xié)同作用的多組分酶系,是一種復(fù)合酶,主要由外切β-葡聚糖酶、內(nèi)切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶等組成,還有很高活力的木聚糖酶。作用于纖維素以及從纖維素衍生出來的產(chǎn)物。微生物纖維素酶在轉(zhuǎn)化不溶性纖維素成葡萄糖以及在果蔬汁中破壞細胞壁從而提高果汁得率等方面具有非常重要的意義。存在于細菌、真菌和動物體內(nèi),能夠催化纖維素降解,是一類可廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、棉紡、環(huán)保及可再生資源利用等領(lǐng)域的酶制劑。纖維素酶測定試劑盒的操作步驟:

  1、樣品的準備

  (1)細菌或細胞:收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液,超聲冰浴破碎細菌或細胞(功率 20%,超聲 3S 秒,間隔 10S,重復(fù) 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

  (2)組織:稱取約 0.1g 組織加入 1mL 提取液,冰浴中勻漿。8000g ,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

  2、加樣表和測定步驟:

  試劑名稱(μL) 對照管 測定管 標準管試劑一 50 50 - 試劑二 200 200 - 雙蒸水 50 50 - 樣本 50 - 煮沸的樣本 50 - 混勻,40℃準確水浴 30min,取出后立即放入沸水中煮沸 15min,得糖化液 混勻,540nm 處蒸餾水調(diào)零,測定吸光值 A,樣品管計算ΔA=A 測定管-A 對照管。標準曲線的建立:540nm 處蒸餾水調(diào)零,讀標準管吸光值 A。以濃度(y)為縱坐標,吸光度 A(x)為橫坐標建立標準曲線。

 

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