1、樣品的準備
(1)細菌或細胞:收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液,超聲冰浴破碎細菌或細胞(功率 20%,超聲 3S 秒,間隔 10S,重復(fù) 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
(2)組織:稱取約 0.1g 組織加入 1mL 提取液,冰浴中勻漿。8000g ,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
2、加樣表和測定步驟:
試劑名稱(μL) 對照管 測定管 標準管試劑一 50 50 - 試劑二 200 200 - 雙蒸水 50 50 - 樣本 50 - 煮沸的樣本 50 - 混勻,40℃準確水浴 30min,取出后立即放入沸水中煮沸 15min,得糖化液 混勻,540nm 處蒸餾水調(diào)零,測定吸光值 A,樣品管計算ΔA=A 測定管-A 對照管。標準曲線的建立:540nm 處蒸餾水調(diào)零,讀標準管吸光值 A。以濃度(y)為縱坐標,吸光度 A(x)為橫坐標建立標準曲線。
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