評估線粒體功能狀態(tài)的基于細胞的檢測方法正在成為闡明線粒體活動在藥物誘導的細胞毒性、細胞凋亡級聯(lián)和其他細胞和生化過程中的作用的有用工具。線粒體膜電位(MMP)的喪失往往與細胞凋亡的早期階段有關。MMP的崩潰與線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔的打開相吻合,導致細胞色素C釋放到細胞質(zhì)中,這反過來又觸發(fā)了凋亡級聯(lián)中的其他下游事件。
線粒體膜電位檢測試劑盒——用一種陽離子染料測量線粒體膜電位,根據(jù)膜電位狀態(tài)發(fā)出綠色或橙色的熒光。在有能量的細胞(膜電位較高)中,染料在細胞質(zhì)中以綠色熒光單體存在,同時在線粒體中以橙色熒光聚集體的形式聚集。然而,在線粒體膜電位受損的細胞(膜電位較低)中,染料主要以綠色熒光單體存在于整個細胞質(zhì)中,在線粒體中不再表現(xiàn)出橙色熒光。
線粒體膜電位檢測試劑盒特點:
1、比JC-1熒光染料靈敏10倍,水溶性好;
2、耐光雙發(fā)射染料;
3、無需漂洗/換液過程;
4、單獨的MITO-lD測定可用于檢測線粒體質(zhì)量;
5、在較低的藥物/劑量濃度下檢測細胞毒性;
6、沒有像JC-1配方那樣的溶劑偽影。
線粒體膜電位檢測試劑盒作用機制:
該染料的基本化學結(jié)構由高度共軛的部分組成,使正電荷廣泛離域,從而允許電泳吸收到J化的線粒體內(nèi)膜的帶負電荷的基質(zhì)相。該染料能夠選擇性地進入線粒體,當膜電位增加時,它的顏色會從綠色可逆地變?yōu)槌壬?雙發(fā)射電位探針)。這種光物理特性是由于在膜J化時可逆地形成J-聚集體,導致在490nm處激發(fā)時,發(fā)射光從~530nm(單體染料的發(fā)射)轉(zhuǎn)移到590nm(J-聚集體形式的發(fā)射)。因此,具有低膜電位的線粒體將積累低濃度的染料,并表現(xiàn)出綠色熒光,而更高J化的線粒體將表現(xiàn)出橙色的熒光。