Q1
什么是脂類？
脂類是脂肪和類脂（磷脂、糖脂、固醇脂等）的統(tǒng)稱，它是構(gòu)成人體組織的正常成分，不溶于水而易溶于酒精等脂溶劑中。脂類與蛋白質(zhì)、碳水化合物是人體的三大營養(yǎng)素，其主要功能是儲能和供能。
脂滴（Lipid Droplet）是中性脂（主要為甘油三酯和酯化膽固醇）的主要貯存場所，是脂肪細胞的主要成分。正常情況下，除脂肪細胞以外，常規(guī)細胞胞質(zhì)內(nèi)不見或僅能看到微量脂滴。
Q2
為什么要進行脂類染色？
1
在病理情況下，心、肝、腎等實質(zhì)器官容易發(fā)生脂肪異常堆積，胞質(zhì)出現(xiàn)脂滴或者脂滴明顯增多以及形成斑塊等現(xiàn)象。因此，通過脂類染色能將這些脂滴清晰的顯現(xiàn)出來，為病理診斷提供圖像參考。
2
研究脂肪生成過程，即干細胞分化為成熟脂肪細胞的機制，對于了解糖尿病、肥胖癥、心血管疾病、肝病和癌癥等疾病的發(fā)病機制和尋找潛在治療方法至關(guān)重要。通過脂類染色可以更直觀地確認脂質(zhì)累積和細胞分化情況。
Q3
常用的脂類染色方法有哪些？
目前常用于脂類染色的有經(jīng)典蘇丹染色、油紅O染色以及尼羅紅熒光染色。脂類染色常規(guī)適用樣本包含速凍、冰凍的動植物切片以及成脂誘導培養(yǎng)細胞。
經(jīng)典蘇丹染料包括蘇丹Ⅲ、蘇丹Ⅳ和蘇丹黑B，是常用的經(jīng)典脂質(zhì)染料，可顯示動物組織的脂質(zhì)積累和植物組織的木栓化，也可用于掩蓋組織脂褐素的自發(fā)熒光。
油紅O屬于新一代蘇丹脂質(zhì)染料，其著色較經(jīng)典染色法更深，特異性也更好。在觀察動脈粥樣硬化斑塊以及肝臟和肌肉脂質(zhì)積累方面具有很好的效用。G1263型改良油紅O染色試劑盒（環(huán)保型）在經(jīng)典異丙醇法的基礎(chǔ)上進行了優(yōu)化更新，解決了染色液易揮發(fā)、染料易沉淀的關(guān)鍵難題，極大的降低了染色難度。
尼羅紅能與脂類物質(zhì)結(jié)合并發(fā)出熒光，在530 nm波長激發(fā)下，顯示強烈桔紅色熒光。染色過程中基本不含有機試劑，對微小脂滴的定位和顯示效果較好?？捎糜诮M織切片和培養(yǎng)細胞的脂類染色，對脂滴進行原位標記，并可搭配DAPI進行形態(tài)學觀察。
Q4
非常規(guī)的脂類染色方法有哪些？
1
特殊石蠟切片染色法：由于脂肪易溶于有機溶劑，所以不能直接乙醇脫水包埋制成石蠟切片進行染色。若是非要制成石蠟切片，需要將初步固定后的組織先浸泡不飽和脂肪酸置換進脂滴，然后置于重金屬酸溶液中固定處理，重金屬酸經(jīng)不飽和脂肪酸的還原作用形成黑色的重金屬——脂質(zhì)復合物，不會被二甲苯、乙醇等有機溶劑所溶解，對很微小的脂肪滴都能清晰顯示。之后再進行脫水、透明等程序包埋成蠟塊，切片后經(jīng)脫蠟、透明可直接中性樹膠封片，切片能夠長期保存。但整個過程所需試劑繁雜，整體操作時間較長，且重金屬酸屬于有毒有害物質(zhì)，所以一般不建議使用本染色方法。
2
制成碳蠟切片染色法：除了經(jīng)典的冰凍切片染色方法外，還可以將組織制成碳蠟切片。碳蠟切片不同于石蠟切片，在組織固定水洗后，不需使用乙醇、二甲苯脫水透明可直接浸蠟包埋，且切片方法與常規(guī)石蠟切片相同，在一定程度上可以減少脂質(zhì)的流失，缺點就是碳蠟吸濕性強，需避光干燥保存。
Q5
樣本如何固定以及染色后如何封片？
固定：樣本可不固定直接切片染色，如需固定則不能使用高濃度小分子醇、酮類的固定液固定，如丙酮和甲醇、乙醇會將脂滴從切片上洗脫從而不利于脂質(zhì)染色，建議使用甲醛類水性固定液，甲醛固定對組織形態(tài)保存效果更佳。
產(chǎn)品貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
G2161 | 中性福爾馬林 固定液(10%) | 500mL/5L |
G2147 | 中性福爾馬林鈣 固定液 | 500mL |
P1110 | 4％組織細胞 固定液 | 100mL/500mL/ 10*500mL |
封片：對于組織切片和細胞爬片，可以使用S2150甘油明膠、抗熒光衰減封片劑等水性封片劑封片，封片后及時拍照留存；對于培養(yǎng)板細胞，建議染色、清洗后不要晾干，使用1×PBS或ddH2O覆蓋細胞表面，保持細胞濕潤，然后在鏡下觀察拍照，晾干會導致鏡下脂滴發(fā)黑影響觀察。
產(chǎn)品貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
S2150 | 甘油明膠封片劑 | 10mL |
S2155 | 水性封片劑 （PVP） | 10mL/100mL |
S2130 | 抗熒光衰減封片劑 （PVP） | 25mL |
Q6
如何對脂質(zhì)染色結(jié)果進行分析？
細胞：細胞經(jīng)染色和洗滌之后，可以使用純的丙酮或異丙醇等脂溶性溶劑提取出脂質(zhì)結(jié)合染料，然后轉(zhuǎn)移至檢測板中在510-520nm測定吸光度。吸光度與樣品的脂質(zhì)含量成正比，并可間接用于評估脂肪生成。
組織：可以使用圖像分析軟件，對脂滴著色面積進行識別計算，除以總面積從而獲得脂滴含量。
有獎問答
脂質(zhì)染色的最佳溫度是多少？
A. 2-8℃ | ||
B.10-20℃ | ||
C. 30-40℃ | ||
D. 60-80℃ |
歡迎大家在評論區(qū)發(fā)送答案和分享脂肪化造模和脂質(zhì)染色的相關(guān)經(jīng)驗，我們會選取最先回答正確的兩位和獲得點贊最多兩位同學送出抗熒光衰減封片劑（PVP）（型號：S2130）一瓶，組織切片、細胞爬片、孔板中培養(yǎng)細胞都可使用哦。
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
G1260 | 飽和油紅O染色液 | 100mL/500mL |
G1262 | 油紅O染色試劑盒 （細胞專用） | 4×20mL/ 4×50mL |
G1265 | 糊精水溶液(1%) | 100mL |
O8291 | 油酸 | 500mL |
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