膽堿酯酶(Cholinesterase,ChE)是一類催化?;憠A水解的酶類,又稱?;憠A水解酶。根據(jù)底物特異性和抑制劑敏感性不同,可將其分為兩類,一類是乙酰膽堿酯酶(AchE,EC 3.1.1.7,又稱真性膽堿酯酶,特異性膽堿酯酶),負(fù)責(zé)水解乙酰膽堿酯;另一類是丁酰膽堿酯酶(BchE,EC 3.1.1.8,又稱血清膽堿酯酶,假性膽堿酯酶,非特異性膽堿酯酶),負(fù)責(zé)水解分子量較大的芳基或烷基膽堿酯,如丁酰膽堿和苯甲酰膽堿。
分布與生理功能
乙酰膽堿酯酶由神經(jīng)細(xì)胞和骨髓新生紅細(xì)胞合成,主要分布于腦灰質(zhì)、神經(jīng)節(jié)內(nèi)的神經(jīng)細(xì)胞和神經(jīng)肌肉接頭等神經(jīng)組織中,在紅細(xì)胞、血清等非神經(jīng)組織中也有分布。乙酰膽堿酯酶的主要生理功能是高效水解神經(jīng)末梢釋放的乙酰膽堿,保證神經(jīng)沖動(dòng)在突觸間的正常傳導(dǎo)。
丁酰膽堿酯酶由肝臟粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)合成,廣泛分布于血清中,在肝臟、肺臟、脾臟等組織中也有分布。丁酰膽堿酯酶半衰期約為10d,較白蛋白半衰期21d短,可靈敏反映肝細(xì)胞蛋白質(zhì)合成能力的變化,因此其活性是臨床診斷肝病的重要生物指標(biāo)之一。丁酰膽堿酯酶的異常過(guò)表達(dá)與阿爾茨海默病高度相關(guān),該病患者血清中丁酰膽堿酯酶活性明顯高于正常水平,而丁酰膽堿酯酶抑制劑可有效緩解患者癥狀。丁酰膽堿酯酶能夠與有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥結(jié)合,清除其對(duì)生物體的毒害作用。
檢測(cè)原理
乙酰膽堿酯酶水解膽堿酯類的速度為:乙酰膽堿>丙酰膽堿>丁酰膽堿,有研究表明,使用乙酰膽堿作為底物測(cè)得的乙酰膽堿酯酶活性是使用丁酰膽堿作為底物測(cè)得活性的30~100倍。因此,可使用乙酰膽堿作為底物檢測(cè)乙酰膽堿酯酶活性,使用丁酰膽堿作為底物檢測(cè)丁酰膽堿酯酶活性。
乙酰膽堿酯酶催化乙酰膽堿水解生成膽堿,丁酰膽堿酯酶催化丁酰膽堿水解生成膽堿,膽堿與二硫?qū)ο趸郊姿幔―TNB)作用生成5-巰基-硝基苯甲酸(TNB);TNB在412nm處有吸收峰,通過(guò)測(cè)定412nm吸光度增加速率,計(jì)算兩種酶的活性。
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溫馨提示
索萊寶生化試劑盒貨號(hào)以“0"、“5"結(jié)尾,分別代表兩類反應(yīng)體系。以“0"結(jié)尾的代表試劑盒所用方法為分光光度法(反應(yīng)體系約1mL),可以用分光光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè);以“5"結(jié)尾的試劑盒代表所用方法為微量法(反應(yīng)體系約0.2mL),可以用分光光度計(jì)或者酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)。
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