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DEPC即二乙基焦碳酸酯（diethylprocarbonate），可滅活各種蛋白質(zhì)，是RNA酶的強(qiáng)抑制劑。原位雜交在雜交及其以前的各步處理中，所有液體試劑都應(yīng)經(jīng)DEPC處理。 在做RNA提取實(shí)驗(yàn)時(shí),實(shí)驗(yàn)器具要用“DEPC水"處理過(guò)，溶液一般都要用"DEPC處理水"來(lái)配制。
DEPC處理水
DEPC處理水即RNAase-free ddH2O, 配制方法是：取市售DEPC 1ml，加入1L待處理水（蒸餾水等）中（即終濃度含0.1% DEPC的水），經(jīng)猛烈振搖后，于室溫靜止數(shù)小時(shí)，然后高壓滅菌，以除去降解DEPC（DEPC分解為CO2和乙醇）。
注意：①DEPC是一種潛在的致癌物質(zhì)，在操作中應(yīng)盡量在通風(fēng)的條件下進(jìn)行，并避免接觸皮膚。②含有Tris緩沖液的溶液中，不能加入DEPC。
DEPC水
DEPC水是指終濃度含0.1% DEPC的水,在1000ml雙蒸水中加入DEPC原液1ml,然后搖勻過(guò)ye
產(chǎn)品使用常見(jiàn)誤區(qū)
誤區(qū)1
重復(fù)使用含DEPC的水處理：
由于DEPC較貴，而且書(shū)上說(shuō)DEPC要用高壓滅菌處理去除，于是有些人就萌發(fā)了重復(fù)使用DEPC的想法，即對(duì)含有DEPC的水不進(jìn)行高壓滅菌，從而重復(fù)使用含DEPC的水處理槍頭、離心管等。節(jié)約本是好事，但這樣的節(jié)約是無(wú)效的。因?yàn)?/SPAN>DEPC在水溶液中不穩(wěn)定，極易分解，DEPC在pH6.0和pH7.0的PBS緩沖液中的半衰期分別約為20min和10min，DEPC在水中的半衰期約為30min。因此，重復(fù)使用含DEPC的水不能保證實(shí)驗(yàn)的RNase-free。
誤區(qū)2
溶液中DEPC含量越高，滅活效果越好：
這個(gè)誤區(qū)錯(cuò)了一半，的確1% DEPC能滅活高達(dá)1000ng/ml的RNase A，而0.1% DEPC只能滅活少于500ng/ml的RNase A。但是溶液中殘留的DEPC副產(chǎn)物會(huì)抑制一些酶反應(yīng)，因此DEPC含量越高，高壓滅菌后的DEPC副產(chǎn)物就越多，抑制越明顯。
誤區(qū)3
必需長(zhǎng)時(shí)間高壓滅菌來(lái)*去除DEPC：
用DEPC處理過(guò)的溶液，在15-20min的高壓滅菌后還可以聞到一股特殊的香味，因此有人認(rèn)為高壓滅菌去除DEPC不*，所以要延長(zhǎng)高壓滅菌的時(shí)間以*去除DEPC。但是延長(zhǎng)高壓滅菌的時(shí)間并不需要，因?yàn)槁劦降奶厥庀阄恫皇?/SPAN>DEPC的，而是DEPC分解產(chǎn)物之一的乙醇同溶液中殘留的微量的羧酸（如甲酸和乙酸等）反應(yīng)產(chǎn)生的揮發(fā)性脂類(lèi)。這種特殊的水果香味不代表有痕量的DEPC殘留。
北京索萊寶公司長(zhǎng)期提供DEPC水和DEPC處理水兩種產(chǎn)品，貨號(hào)分別是D8210和R1600.特別是DEPC處理水可以直接用于實(shí)驗(yàn)耗材的RNA酶的清除作用。
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