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全血基因組DNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)
本試劑盒采用可以特異性結(jié)合DNA的離心吸附柱和*的緩沖液系統(tǒng)，提取全血基因組DNA。離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料為本公司*新型材料，能夠高效、專(zhuān)一吸附DNA，可大限度去除雜質(zhì)蛋白及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物。提取的基因組DNA段大，純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。使用本試劑盒提取的基因組DNA可用于各種常規(guī)操作，包括酶切、 PCR、文庫(kù)構(gòu)建、Southern雜交等實(shí)驗(yàn)。
操作步驟：
使用前請(qǐng)先在漂洗液和溶液B中加入無(wú)水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶體上的標(biāo)簽。所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心。
1、樣品的處理(本產(chǎn)品適用于處理新鮮的或已經(jīng)添加抗凝劑的0.lml-1ml血液樣品)：
a、在血液樣品中加入2-3倍體積的紅細(xì)胞裂解液，充分顛倒混勻，12000rpm離心1min，小心吸去上清，沉淀應(yīng)為白色或淡紅色，如果裂解不*，可重復(fù)以上述步驟一次。向沉淀中加200ul溶液A，振蕩*混勻。
b、如果處理的血樣為禽類(lèi)、鳥(niǎo)類(lèi)、兩棲類(lèi)或更低級(jí)生物的血液，其紅細(xì)胞為有核細(xì)胞，因此處理量為5-20u1，不需要再用紅細(xì)胞裂解液處理，直接加200ul溶液A，振蕩*混勻。
2、向懸浮液中加入20ul (10mg/ml) 的RNase A，充分顛倒混勻，室溫放置10min。
3、加入20ul ( 10mg /ml ) 的蛋白酶K，充分顛倒混勻，65℃水浴消化30-60min，消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次，直樣品消化*為止。
4、加入2倍體積溶液B(使用前請(qǐng)先檢查是否己加入無(wú)水乙醇)，充分顛倒混勻，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，不影響DNA的提取，可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中，室溫放置2min。
5、12000rpm離心2min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
6、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇)， 12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
7、向吸附柱中加入500ul漂洗液，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
8、12000rpm離心2min，將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會(huì)影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR等。
9、將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加50-200ul經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的洗脫液，室溫放置5min，12000rpm離心1min。
10、離心所得洗脫液再加入吸附柱中，12000rpm離心2min，即可得到高質(zhì)量的基因組DNA。
注意事項(xiàng):
1、本試劑盒置于室溫( 15 -25℃) 干燥條件下可保存12個(gè)月，更長(zhǎng)時(shí)間的保存可置于2 -8℃。
2、常用的血液抗凝劑有EDTA、ACD和肝素等，需注意的是，如欲制備大分子量血液基因組DNA，可優(yōu)先考慮使用ACD抗凝。一般不使用肝素抗凝，因?yàn)橛酶嗡乜鼓难禾崛〉幕蚪MDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)，有PCR擴(kuò)增抑制現(xiàn)象。
3、樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致提取的DNA段較小且提取量也下降。
4、如果試劑盒中的溶液出現(xiàn)沉淀，可在65℃水浴中重新溶解后再使用，不影響效果。
5、絕大多數(shù)哺乳動(dòng)物的全血如入全血中的紅細(xì)胞無(wú)核，故在提取基因組DNA時(shí)需去除不含DNA的無(wú)核紅細(xì)胞，以免影響紅細(xì)胞裂解和DNA釋放。如果處理的血樣為禽類(lèi)、鳥(niǎo)類(lèi)、兩棲類(lèi)或更低級(jí)生物的血液，其紅細(xì)胞為有核細(xì)胞，因此處理量減少為5-20ul，不需要再用紅細(xì)胞裂解液來(lái)裂解紅細(xì)胞。
6、洗脫緩沖液的體積不少于50ul，體積過(guò)小會(huì)影響回收效率:洗脫液的pH值對(duì)洗脫效率也有影響，若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)此范圍)，pH 值低于7.0會(huì)降低洗脫效率。
相關(guān)產(chǎn)品：
D1850 全血基因組DNA提取試劑系統(tǒng)
E1020 EB染色液
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