產品名稱:基因工程試劑BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細胞
產品型號:C1500
產品特點:基因工程試劑BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細胞貨號:C1500規(guī)格:10×100ul / 20×100ul保存:-70℃保存,干冰運輸。自收貨之日起液氮保存少一年,-70℃保存少 6 個月。產品簡介:本公司生產的BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細胞是采用大腸桿菌BL21(DE3)pLysS菌株經特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞,可用于DNA的化學轉化。
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基因工程試劑BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細胞
貨號:C1500
規(guī)格:10×100ul / 20×100ul
保存:-70℃保存,干冰運輸。自收貨之日起液氮保存少一年,-70℃保存少 6 個月。
產品簡介:
本公司生產的BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細胞是采用大腸桿菌BL21(DE3)pLysS菌株經特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞,可用于DNA的化學轉化。使用pUC19 質粒檢測,轉化效率可達 10 7 ,-70℃保存 6 個月轉化效率不發(fā)生改變。
基因型:F-, ompT, hsdSB(rB-mB-), dcm, gal(DE3), pLysS, Cmr
特點:該菌株帶有質粒 pLysS,因此具有氯霉素抗性。質粒 pLysS 含有表達 T7 溶菌酶的基因,能夠降低目的基因的背景表達水平,但不干擾目的蛋白的表達。該菌適合表達毒性蛋白和非毒性蛋白。
操作方法:(以下各步驟均為無菌操作)
1、將感受態(tài)細胞置于冰上融化,以下實驗以 100ul 感受態(tài)細胞為例。
2、向感受態(tài)細胞懸液中加入需轉化的目的 DNA,注意目的 DNA 的體積不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一,輕輕旋轉離心管以混勻內容物,冰浴放置 30 分鐘。
3、將離心管置于 42℃水浴中放置 60-90 秒,然后快速轉移到冰浴中放置 2-3 分鐘,不要搖動離心管。
4、向離心管中加入 500ul 無菌無抗的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基,37℃ 150rpm 振蕩培養(yǎng) 1 小時。目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達,使菌體復蘇。
5、取適量已轉化的感受態(tài)細胞涂布含相應抗生素的 SOC 或 LB 平板,37℃倒置培養(yǎng) 12-16 小時。涂布用量可根據(jù)具體實驗來調整,如轉化的 DNA 總量較多,可取 100ul 左右的轉化產物涂板;反之,如轉化的 DNA總量較少,可取 200-300ul 的轉化產物涂板。如果預計的克隆較少,可通過離心后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。涂布剩余的菌液可 4℃保存,如果次日的轉化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的平板。
注意事項:
1、實驗過程中應嚴格無菌操作,防止其它 DNA 或雜菌的污染,避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。
2、感受態(tài)細胞不可反復凍融,否則其轉化效率將會降低。
3、轉化時,轉化效率與外源 DNA 的濃度在一定范圍內成正比,但當加入的外源 DNA 量過多或體積過大反而會降低轉化效率。轉化時 DNA 體積要小于感受態(tài)細胞體積的十分之一。
4、為防止轉化實驗不成功,可以保留部分連接產物,以重新轉化,將損失將到低。
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基因工程試劑BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細胞訂購說明:
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1、極低溫產品:極低溫產品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產品包裹起來,再用泡沫盒密封,膠帶層層粘住泡沫盒,放入索萊寶的箱子,然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產品的性質穩(wěn)定如一,為您的實驗保駕護航。
2、低溫產品:低溫產品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產品包裹起來,再使用泡沫盒密封,用膠帶嚴實密封泡沫盒,再放入索萊寶的箱子(保溫效果少可以持續(xù)一周),然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產品的性質穩(wěn)定如一,為您的實驗保駕護航。
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