產(chǎn)品名稱：還原型谷胱甘肽(GSH)含量檢測試劑盒 常量

產(chǎn)品英文名： Reduced Glutathione (GSH) Assay Kit

產(chǎn)品貨號：BC1170                 產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓

產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣                 產(chǎn)品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格：240
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字：還原型谷胱甘肽試劑盒|活性檢測試劑盒|GSH含量檢測|試劑盒


簡要介紹：
GSH 是細胞內(nèi)主要的抗氧化巰基物質(zhì)，在抗氧化、蛋白質(zhì)巰基保護和氨基酸跨膜運輸?shù)戎芯哂兄匾饔谩＿€原型與氧化型比值（GSH/GSSG）是細胞氧化還原狀態(tài)的主要動態(tài)指標。因此，測定細胞內(nèi) GSH 和 GSSG 含量以及 GSH/GSSG 比值，能夠很好地反映細胞所處的氧化還原狀態(tài)。 
    DTNB 與 GSH 反應(yīng)生成復(fù)合物，在 412nm 處有特征吸收峰；其吸光度與 GSH 含量成正比。 

產(chǎn)品詳細描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體1瓶，50mL，4℃保存。
試劑二：液體1瓶，50 mL，4℃保存。
試劑三：液體1瓶，15 mL，4℃避光保存。
標準品：粉劑1支，10mg，4℃避光保存。
產(chǎn)品說明：
谷胱甘肽是由谷氨酸（Glu）、半胱氨酸（Cys）和甘氨酸（Gly）組成的天然三肽，是一種含巰基（—SH）的化合物，廣泛存在于動物組織、植物組織、微生物和酵母中。谷胱甘肽能和5,5’-二硫代-雙-（5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）反應(yīng)產(chǎn)生2-硝基-5-巰基ben甲酸和谷胱甘肽二硫化物（GSSG）。2-硝基-5-巰基ben甲酸為黃色產(chǎn)物，在波長412nm處具有大光吸收。
自備儀器和用品：
分析天平、微量勻漿器（規(guī)格2ml）、低溫離心機、水浴鍋、移液器、可見分光光度計，1ml比色皿。
樣品的處理
1、組織處理：
新鮮組織先用PBS沖洗2次，然后稱取動物組織或者植物組織0.1g。加入用試劑一潤洗過的勻漿器中（勻漿器提前放冰上預(yù)冷）；然后加入1ml試劑一（組織/試劑一比例保持不變即可），迅速冰上充分研磨（使用液氮研磨效果更好）；8000g 4℃離心10min；取上清液放置于4℃待測，若暫時不能完成測試可放于-80℃保存（可保存10天）。
2、血液處理
血漿：將收集的抗凝血于4℃，600g離心10分鐘，吸取上層血漿到另一支試管中，加入等體積的試劑一, 4℃，8000g離心10分鐘,將上清移入新的試管中放置于4℃待測，若暫時不能完成測試可放于-80℃保存（可保存10天）。
血細胞：將收集的抗凝血于4℃，600g離心10分鐘，棄去上層血漿用3倍體積的PBS清洗3次（用PBS重懸血細胞，600g離心10分鐘），加入等體積試劑一，混勻后4℃放置10分鐘，8000g離心10分鐘，吸取上清放于4℃待測，若暫時不能完成測試可放于-80℃保存（可保存10天）。
3、細胞處理
收集不少于10⁶個細胞，先用PBS清洗細胞2次（PBS重懸細胞，600g離心10分鐘），加入3倍細胞沉淀體積的試劑一重懸細胞，反復(fù)凍融2-3次（可在液氮中凍結(jié)，37℃水浴中溶解），8000g離心10分鐘，收集上清于4℃待測，若暫時不能完成測試可放于-80℃保存（可保存10天）。
操作步驟

1. 分光光度計預(yù)熱30min以上，分光光度計調(diào)節(jié)波長412nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二放置37℃（哺乳動物）或25℃（一般物種）水浴中保溫30min。
3. 空白管檢測：取1ml比色皿，依次加入100μL蒸餾水，700μL試劑二，200μL試劑三，混勻，放置2min后測定412nm吸光度A1。
4. 制作標準曲線

稱1mg標準品用1ml蒸餾水溶解，濃度為1mg/ml。取適當(dāng)溶液配制濃度為200μg/ml、100μg/ml、50μg/ml、25μg/ml、12.5μg/ml的標準品（試劑一十倍稀釋后進行稀釋）。
取1.5mlEP管依次加入100μL標準品，700μL試劑二，200μL試劑三，每管混勻后靜置2min，檢測412nm處吸光度，吸光度減去空白孔（A1）為橫坐標，根據(jù)吸光度（x）和濃度（y，μg/ml）做出標準曲線。

5. 樣品管測定：取1ml比色皿，依次加入100μL樣品，700μL試劑二，200μL試劑三，混勻后靜置2min檢測412nm處吸光度A2，△A= A2- A1。

GSH含量計算
根據(jù)標準曲線，將樣品△A帶入公式中（x），計算出樣品濃度y（μg/ml）。
（1）按蛋白濃度計算 
GSH（μg / mg prot）=y×V 反總÷V 樣÷Cpr =y×10÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計算 
GSH（μg /g）= y×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)= y×10 ÷W
（3）按細胞數(shù)量計算 
GSH（μg /10⁴ cell）= y×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細胞數(shù)量)= y×10 ÷細胞數(shù)量 
（4）按液體體積計算 
GSH（μg / mL）= y×V 反總÷V 樣= y×10
V 反總：反應(yīng)總體積，1mL；V 樣總：上清液總體積，1 mL；V 樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，100μL=0.1 mL；W：樣品質(zhì)量，g ；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL。 
注意事項：

1. 樣品處理需勻漿*，若當(dāng)天不能完成測量，可放-80℃保存。
2. 標準品：還原型谷胱甘肽現(xiàn)配現(xiàn)用。
3. 若不確定樣品中GSH含量的高低，可稀釋幾個梯度后再進行測量。
4. 因為試劑一中含有蛋白質(zhì)沉淀劑，因此上清液不能用于蛋白濃度測定。

相關(guān)文獻:
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《MicroRNA-98 reduces amyloid β-protein production and improves oxidative stress and mitochondrial dysfunction through the Notch signaling pathway via HEY2 in Alzheimer's disease mice》 作者:Fang?Zhou Chen Ying Zhao Hui?Zhao Chen 期刊:International Journal of Molecular Medicine 影響因子:2.928 PMID:30365070
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《Light-Responsive Metal–Organic Framework as an Oxidase Mimic for Cellular Glutathione Detection》 作者:Yufeng Liu,Min Zhou,Wen Cao,Xiaoyu Wang,Quan Wang,Sirong Li and Hui Wei 期刊:Anal Chem. 影響因子:6.35 PMID:31148448
 

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