產(chǎn)品名稱:：谷胱甘肽還原酶(GR)活性檢測試劑盒

產(chǎn)品英文名： Glutathion Reductases(GR) Assay Kit

產(chǎn)品貨號：BC1160          產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓

產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣            產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格：240
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字：谷胱甘肽還原酶試劑盒|活性檢測試劑盒|GR活性檢測|試劑盒|

簡要介紹：
GR 是廣泛存在于真核和原核生物中的一種黃素蛋白氧化還原酶，是谷胱甘肽氧化還原循環(huán)的關(guān)鍵酶之一(通常昆蟲中 GR 被 TrxR 取代)。GR 催化NADPH 還原 GSSG 生成 GSH，有助于維持體內(nèi)GSH/GSSG比值。GR 在氧化脅迫反應(yīng)中對活性氧清除起關(guān)鍵作用，此外 GR還參與抗壞血酸-谷胱甘肽循環(huán)途徑。
    GR能催化NADPH還原GSSG再生GSH，同時不斷消耗NADPH生成NADP+；NADPH在340nm有特征吸收峰，相反NADP+在該波長無吸收峰；通過測定340nm吸光度下降速率；來測定NADPH脫氫速率，從而計算GR活性。


產(chǎn)品詳細描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體3mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入5.0 mL蒸餾水，混勻。
產(chǎn)品說明：
GR是廣泛存在于真核和原核生物中的一種黃素蛋白氧化還原酶，GR催化GSSG還原生成GSH，是谷胱甘肽氧化還原循環(huán)的關(guān)鍵酶之一（通常昆蟲中GR被TrxR取代）。GR催化NADPH還原GSSG生成GSH，有助于維持體內(nèi)GSH/GSSG比值。GR在氧化脅迫反應(yīng)中對活性氧清除起關(guān)鍵作用，此外GR還參與抗壞血酸－谷胱甘肽循環(huán)途徑。
GR能催化NADPH還原GSSG再生GSH，同時NADPH脫氫生成NADP+；NADPH在340 nm有特征吸收峰，相反NADP+在該波長無吸收峰；通過測定340 nm吸光度下降速率來測定NADPH脫氫速率，從而計算GR活性。
自備儀器和用品：
紫外-可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、移液器、1mL石英比色皿和蒸餾水
操作步驟：
一、粗酶液提取：
稱約0.1g組織，加入1.0 ml試劑一，冰上充分研磨，10000rpm 4℃離心10min，取上清液，待測。
二、GR測定操作：
1. 紫外-可見分光光度計預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長到340 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑一置于25℃（普通物質(zhì)）或者37℃（哺乳動物）中預(yù)熱30min以上。
3. 空白管：取1mL石英比色皿，加入50μL試劑二，100μL試劑三，850μL試劑一，于340nm測定10 s和190 s吸光度，記為A空1和A空2。
4. 測定管：取1mL石英比色皿，加入50μL試劑二，100μL試劑三，100μL上清液，750μL試劑一，于340nm測定10 s和190 s吸光度，記為A測1和A測2。
注：樣品測定10s時吸光度后，將比色皿放入25℃（普通物質(zhì)）或者37℃（哺乳動物）水浴，3min后拿出，吸打混勻，立即測定190s時的吸光度。
三、GR活性計算：
（1）按蛋白濃度計算
活性單位定義：在一定溫度中，pH8.0條件下，每毫克蛋白每分鐘催化1μmol NADPH氧化為一個酶活力單位。
GR酶活(U/mg prot)= [ (△A測定管-△A空白管)÷ε÷d×V反總×10⁶] ÷[Cpr×V樣]÷T
                     =0.536×(△A測定管-△A空白管)÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
活性單位定義：在一定溫度中，pH8.0條件下，每克樣品每分鐘催化1μmol NADPH氧化為一個酶活力單位。
GR酶活(U/g 鮮重)= [ (△A測定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反總×10⁶] ÷(V樣÷V樣總×W)÷T
                =0.536×(△A測定管-△A空白管)÷W
△A空白管=A空1-A空2，△A測定管=A測1-A測2；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)6.22×10³L/mol/cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，1000μL=0.001 L；10⁶：1 mol=1×10⁶μmol；Cpr：上清液蛋白濃度（mg/mL）；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，100μL =0.1 mL；T：反應(yīng)時間，3 min；W：樣本鮮重，g。
注意事項：
（1）樣品處理等過程均需要在冰上進行，且須在當(dāng)日測定酶活力，勻漿液避免反復(fù)凍融；
（2）試劑三須現(xiàn)配現(xiàn)用，配置完后，置于冰上；
（3）測定前須先用1～2個樣做預(yù)實驗，確保180s內(nèi)吸光值變化呈線性，哺乳動物組織一般須用試劑一稀釋2～5倍；
（4）細胞中GR活性測定時，細胞數(shù)目須在300萬-500萬之間，細胞中GR的提取時可加試劑一后研磨或超聲波處理，不能用細胞裂解液處理細胞。

相關(guān)文獻：
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《Geobacter sulfurreducens-inoculated bioelectrochemical system reveals the potential of metabolic current in defining the effect of extremely low-frequency electromagnetic field on living cells.》 作者:ZhenhuaShi 期刊:Ecotoxicol. Environ. Saf. 影響因子:4.527 PMID:30743077
 

谷胱甘肽還原酶(GR)活性檢測試劑盒