產品名稱:雙縮脲法蛋白含量測定試劑盒
產品型號:BC3180
產品特點:雙縮脲法蛋白含量測定試劑盒測定意義:樣品可溶性蛋白質含量常常用于酶活性計算。此外,可溶性蛋白質含量也用于食品等質量分析。測定原理:強堿性溶液中,雙縮脲與 CuSO4 形成紫色絡合物;紫色絡合物顏色的深淺與蛋白質濃度成正比,而與蛋白質分子量及氨基酸成分無關,故可用來測定蛋白質含量。該方法測定范圍為1~10mg 蛋白質,適用于蛋白質濃度高的樣品,尤其是動物材料。
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雙縮脲法蛋白含量測定試劑盒
試劑組成和配制試劑一:液體×1 瓶,4℃保存。標準品:液體×1 瓶,5 mg/mL,4℃保存。樣品中可溶性蛋白質提取 1. 液體樣品:澄清無色液體樣品可以直接測定。 2. 組織樣品:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液(自備,根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水))冰浴勻漿,8000g,4℃離心 10min,取上清,即待測液。(動物樣品常常需要稀釋) 3. 細菌、真菌:按照細胞數(shù)量(104 個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細胞加入 1mL 提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時間 3min);然后 8000g,4℃,離心 10min,取上清置于冰上待測。
雙縮脲法蛋白含量測定試劑盒
測定操作 1. 分光光度計預熱 30 min,調節(jié)波長到 540 nm,蒸餾水調零。 2. 空白管:取 1 mL 玻璃比色皿,加入 200μL 蒸餾水,1000μL 試劑一,混勻后室溫靜置 15 min,于 540nm 比色,記為 A 空白管。 3. 標準管:取 1 mL 玻璃比色皿,加入 200μL 標準液,1000μL 試劑一,混勻后室溫靜置 15 min,于 540 nm 比色,記為 A 標準管。 4. 測定管:取 1 mL 玻璃比色皿,加入 200μL 待測液,1000μL 試劑一,混勻后室溫靜置 15 min,于 540nm 比色,記為 A 測定管。
注意事項: 1.樣品蛋白濃度須在 1~10mg/ml 范圍內,低于 1mg/ml 不能用此法,高于 10mg/ml 須做相應稀釋。因此測定前用 1~2 個樣做預實驗,確保蛋白濃度在 1~10mg/ml 范圍內。 2.待測樣品蛋白提取可用生理鹽水、雙蒸水或不含蛋白的 PBS 提取。該法受硫酸銨、Tris 緩沖液干擾,提取液中應不含這些物質;否則改用 BCA 蛋白質含量測定試劑盒。
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