產(chǎn)品名稱:丙酮酸(PA)測(cè)定試劑盒 微量法
產(chǎn)品型號(hào):BC2205
產(chǎn)品特點(diǎn):丙酮酸(PA)測(cè)定試劑盒 微量法品牌:Solarbio | 貨號(hào):BC2205 檢測(cè)方法 : 微量法規(guī)格:100管/96樣
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丙酮酸(PA)測(cè)定試劑盒 微量法
測(cè)定意義:丙酮酸通過乙酰CoA連接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代謝,起著重要的樞紐作用。
測(cè)定原理:丙酮酸與2,4-二硝基苯肼作用,生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙,在堿性溶液中呈櫻紅色。
需要的儀器,耗材:可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、蒸餾水。
丙酮酸(PA)測(cè)定試劑盒 微量法
丙酮酸提?。?1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次),靜置 30min, 8000g,25℃離心 10min,取上清待測(cè)。 2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),進(jìn)行冰浴勻漿,靜置 30min,8000g,25℃離心 10min,取上清待測(cè)。 3、血清(漿)樣品:按照血清(漿)體積(mL):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議取 0.1mL 血清(漿)加入 1mL 提取液),進(jìn)行冰浴勻漿,靜置 30min, 8000g,25℃離心 10min,取上清待測(cè)。
測(cè)定意義:丙酮酸通過乙酰CoA連接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代謝,起著重要的樞紐作用。
測(cè)定原理:丙酮酸與2,4-二硝基苯肼作用,生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙,在堿性溶液中呈櫻紅色。
需要的儀器,耗材:可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、蒸餾水。
丙酮酸提取: 1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次),靜置 30min, 8000g,25℃離心 10min,取上清待測(cè)。 2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),進(jìn)行冰浴勻漿,靜置 30min,8000g,25℃離心 10min,取上清待測(cè)。 3、血清(漿)樣品:按照血清(漿)體積(mL):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議取 0.1mL 血清(漿)加入 1mL 提取液),進(jìn)行冰浴勻漿,靜置 30min, 8000g,25℃離心 10min,取上清待測(cè)。
丙酮酸含量計(jì)算: a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下 1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為 y = 0.0466x + 0.0675; x 為丙酮酸鈉含量(µg/mL),y 為吸光值。 2、按照血清(漿)體積計(jì)算丙酮酸含量(μg/mL)= [(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(V3×V1÷V2)=214.6×(A-0.0675) 3、按照蛋白濃度計(jì)算丙酮酸含量(μg/mg prot)=[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(V1×Cpr)=21.46×(A-0.0675) ÷Cpr 4、按照樣品質(zhì)量計(jì)算丙酮酸含量(µg/g 鮮重)= [(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(W ×V1÷V2)=21.46×(A-0.0675) ÷W 3、按照細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算丙酮酸含量(μg/104 cell)=[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(500×V1÷V2)=0.043×(A-0.0675)
測(cè)定意義:丙酮酸通過乙酰CoA連接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代謝,起著重要的樞紐作用。
測(cè)定原理:丙酮酸與2,4-二硝基苯肼作用,生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙,在堿性溶液中呈櫻紅色。
需要的儀器,耗材:可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、蒸餾水。
丙酮酸提取: 1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次),靜置 30min, 8000g,25℃離心 10min,取上清待測(cè)。 2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),進(jìn)行冰浴勻漿,靜置 30min,8000g,25℃離心 10min,取上清待測(cè)。 3、血清(漿)樣品:按照血清(漿)體積(mL):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議取 0.1mL 血清(漿)加入 1mL 提取液),進(jìn)行冰浴勻漿,靜置 30min, 8000g,25℃離心 10min,取上清待測(cè)。
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